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HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關問題

點擊次數(shù):2053 發(fā)布時間:2019-06-21
     HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關問題
    柱前衍生被測組分通過衍生化反應,轉化為衍生化產(chǎn)物,然后再經(jīng)過色譜柱進行分離。液相色譜法中柱前衍生的目的是:通過衍生化反應,使原來不能直接被檢測的組分轉化為能被所用檢測器檢測的物質;使被測組分與衍生化試劑有選擇地參加反應,而與樣品中的其他組分分離;改變被測組分在色譜柱的出峰次序,使之更有利于分離。柱前衍生的點是可以不必嚴格限制衍生化反應條件,可以允許較長的反應時間及使用各種形式的反應器。其缺點是當一個復雜組分樣品經(jīng)過衍生化反應后,有可能產(chǎn)生多種衍生化產(chǎn)物,給色譜分離帶來困難。
    柱后衍生利用衍生反應使被測物與相應的試劑反應,以改變其物理或化學性質,使其被檢測到。例如將發(fā)色基團或熒光基團鍵合到樣品中去,多放大檢測靈敏度,柱后衍生系統(tǒng)開創(chuàng)了柱后衍生系統(tǒng)性能、價格及外形的標準。
    HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關問題?1)為什么要衍生?2)衍生化的分類?3)進行衍生,適用的化合物有哪些?4)進行衍生化的要求有哪些?5)柱前衍生和柱后衍生的缺點?
    答:色譜技術中的化學衍生法系指在色譜過程中用的化學試劑(一般稱為衍生化試劑或標記試劑)使樣品成分轉變相應的衍生物之后進行分離檢測或進行檢測的方法。目的為:
    1.將紫外—可見吸收功能基團引入被檢測對象或將其轉變?yōu)闊晒庋苌?,以提檢測靈敏度;
    2.提對分析樣品的分離和選擇性。
    從是否與HPLC系統(tǒng)聯(lián)機的角度,化學衍生法分為在線(on line)與離線(Off line)兩種。從發(fā)生衍生化的場合,分為柱前衍生法(pre-columnderivatization)與柱后衍生法(post-columnderivatization)兩種。
    目前,在HPLC中,以離線的柱前衍生法(簡稱柱前衍生法)與在線的柱后衍生法(簡稱柱后衍生法)使用居多。

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